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我所在基因表达精确调控技术方面获新进展
  来源:3003必赢贵宾会官网 发布时间:2013-11-21    供稿部门:张学礼课题组

  基因表达精确调控技术是代谢工程和合成生物学的核心技术之一,对优化目标产品合成途径的效率,提高人工合成细胞的生产能力起着至关重要的作用。传统的提高目标产品合成能力的策略是采用质粒过表达的方法对基因表达进行调控,然而这种方法有许多弊端:1)需要添加IPTG和阿拉伯糖等昂贵的诱导剂来进行诱导;2)质粒的维持对宿主细胞会造成很大的代谢负荷;3)很多质粒的遗传稳定性不好;4)很多化合物的生产需要在细胞中构建出一条复杂的合成途径,因此需要引入包含多个基因的长DNA片段,而大部分质粒都比较难携带长DNA片段;5)为了使微生物合成目标产品的代谢流达到最大,必须精确控制合成途径中各个基因的表达强度,使它们达到协同表达的状态。目前广泛使用的诱导型启动子其强度都是固定的,不能满足精确调控基因表达强度的需求。通过使用具有不同表达强度的人工调控元件,直接在染色体上对基因表达进行精确调控,可以很好地解决上述质粒过表达的问题。 

  我所张学礼研究员领导的微生物代谢工程研究组通过Red重组技术,在大肠杆菌的染色体上分别构建了启动子、信使RNA稳定区和核糖体结合位点的标准化调控元件库,并精确定量了文库中每个元件的强度。最终获得一个包含400个调控元件的标准化数据库,元件的强度差异达到4个数量级。在此基础上,开发了一步法基因表达精确调控技术,可以使用一对通用引物,快速高效地将待调控的基因表达替换为各种强度。该研究已经申请了一项中国专利,并在线发表于Appl Microbiol Biotechnol. 

  张学礼研究组使用该技术,优化了非PTS葡萄糖转运途径。通过对galPglk的基因表达的组合精确调控,筛选出一个最佳的调控强度组合,使大肠杆菌的生长速率提高了4倍,葡萄糖消耗速率提高了10倍,并有效地提高了丁二酸合成关键前体磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的供给,为丁二酸合成途径的优化奠定了基础。

论文链接:http://www.springerlink.com/content/h5306607043263t5/

 
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